Evaluation of a high-throughput nucleic acid extraction method for the detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in bovine fecal samples by PCR

Johne’s disease (paratuberculosis) is an economically important disease of cattle worldwide. The disease is caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), a fastidious gram-positive bacterium. PCR is increasingly used in diagnostic laboratories for the detection of MAP in fecal samples given the rapid test turnaround time and sensitivity and specificity comparable to fecal culture. However, efficient extraction of DNA for sensitive detection of MAP by PCR is affected by the complex lipid-rich cell wall of MAP and the presence of PCR inhibitors in feces. We evaluated a high-throughput nucleic acid extraction method (MagMAX core nucleic acid purification kit with mechanical lysis module) in conjunction with an hspX gene PCR for the detection of MAP from bovine fecal samples, which resulted in correct identification of all negative (13 of 13) and positive (35 of 35) proficiency test samples obtained from the National Veterinary Services Laboratories. In addition, all 6 negative and 50 of 51 positive diagnostic specimens tested were categorized correctly.     

论桑树病虫害与蚕病危害的关系

受管理理念的影响，桑树肥培管理工作存在一定的问题，加剧蚕病的扩散和蔓延，降低桑树 和蚕茧的生产质量，造成整体的经济效益不高。为此，本文深入分析桑树病虫害与蚕病危害的关系， 并提出防治的措施，以供参考。     

红富士生长特性及主要病害的防治

招远市是红富士之乡，是我国红富士苹果的主产区之一。产出的红富士苹果色艳形正、口感 清爽、汁多脆甜、久贮不绵，备受市场欢迎和好评。产量稳定、质量上乘得益于得天独厚的自然条件和 先进的生产技术，得益于果农的辛劳付出，更得意于国家的好政策。生产中，充分了解红富士的生长 特性，并及时防治病害，是确保产量和品质的前提措施之一。     

烯丙孕素内服溶液的临床药效和靶动物安全性研究

研究国产烯丙孕素内服溶液的临床药效和靶动物安全性，为其新兽药注册和临床合理应用提供依据。通过发情间隔、发情率、发情集中度、妊娠率等指标评价烯丙孕素内服溶液调控母猪同期发情的临床效果；通过比较给药前后的临床体征、血常规指标、血清生化指标及组织病理学变化，评价烯丙孕素内服溶液对靶动物母猪的安全性。实验性临床试验中，国产烯丙孕素内服溶液高（25 mg·d-1）、中（20 mg·d-1）、低（10 mg·d-1）剂量组以及空白对照组的母猪从停药到出现发情反应的间隔时间分别为（3.45±0.81）（3.35±0.66）（5.21±2.65）和（11.71±5.39）d，发情率分别为100%（20/20）、100%（20/20）、95%（19/20）、70%（7/10）。扩大临床试验中，国产烯丙孕素内服溶液组和进口药物对照组的母猪在药物调控下均表现出良好的同期发情效果，发情间隔分别为（3.59±1.07）d和（3.75±1.22）d，发情率分别为96.72%（59/61）和98.33%（59/60）。靶动物安全性试验中，国产烯丙孕素内服溶液在5倍推荐剂量（100 mg·d-1）范围内对母猪的血液生理生化功能和主要脏器未造成明显的不良影响。结果表明，国产烯丙孕素内服溶液调控母猪同期发情，一次量20 mg，连续给药18 d，临床应用安全、有效。     

硫磺对苹果连作土壤环境及平邑甜茶幼苗生长的影响

以盆栽的试验方式，研究了在老龄苹果园土壤中添加不同量（0、0.1、0.3、0.5 g ? kg-1）的硫磺对土壤微生物环境及再植平邑甜茶（Malus hupehensis Rehd.）幼苗的影响，为减轻苹果连作障碍提供理论依据。温室和露地盆栽结果显示：硫磺对改善连作土壤环境及促进平邑甜茶幼苗的生长具有良好的效果，但不同添加量促进效果不尽相同，其中以0.3 g ? kg-1的促进效果最为显著。与对照相比，0.3 g ? kg-1的硫磺处理浓度下平邑甜茶幼苗株高、地径、鲜质量、干质量分别增加了60.83%（26.03%，露地数据，下同）、26.78%（19.66%）、73.44%（62.15%）和93.32%（72.93%）；根长、根表面积、根体积、根尖数、根系呼吸速率提高了1.47倍（1.82倍）、2.28倍（2.05倍）、2.05倍（2.74倍）、1.73倍（1.67倍）、2.12倍（1.98倍）。硫磺处理后叶片叶绿素含量、光合参数、土壤酶的活性均有不同程度提高。0.3 g ? kg-1硫磺处理具有最高的细菌与真菌比值、真菌的丰富度和多样性指数及最低的优势度指数。主成分分析发现，随硫磺添加量增加，土壤真菌群落与对照距离越来越远，但当添加量由0.3 g ? kg-1增加至0.5 g ? kg-1对改善连作土壤环境的效果不是特别明显。实时荧光定量结果表明，硫磺的添加可以显著降低串珠镰孢菌基因拷贝数。综上，0.3 g ? kg-1硫磺处理可较好地优化土壤环境，促进平邑甜茶幼苗的生长，可作为一种减轻苹果连作障碍的有效方法。     

中国野生毛葡萄芪合酶基因VqSTS11和VqSTS23调控抗白粉病的研究

利用同源克隆法得到抗白粉病的中国野生毛葡萄‘丹凤–2’芪合酶基因VqSTS11和VqSTS23的开放阅读框，并构建过表达载体；通过器官发生途径诱导不抗白粉病的欧洲葡萄‘无核白’分生愈伤组织并采用农杆菌介导法对其进行转化；经过PCR检测和Western blot鉴定，获得了5株VqSTS11超量表达植株和3株VqSTS23超量表达植株；人工接种白粉菌发现，转基因植株中白粉菌菌丝生长速度慢，孢子萌发受到一定的抑制，并且转基因植株中芪合酶基因相对表达量升高，抗病相关基因表达上调，芪类物质含量积累增多。本研究结果进一步证明中国野生毛葡萄‘丹凤–2’芪合酶基因VqSTS11和VqSTS23对白粉菌具有抗性，‘丹凤–2’可以为改良欧洲葡萄品种抗病性提供抗病基因，作为抗病育种的资源。     

中早熟辣椒新品种‘农大7号’

‘农大7号’辣椒是以HP1016为母本，Y0931为父本杂交选育而成。植株长势强，平均株高78.7 cm，中早熟。果实羊角形，青熟果黄绿色，果面光滑，果肉厚，平均单果质量80 g，平均单株结果数26.8个。果实维生素C含量0.56 mg • g-1，粗纤维含量1.15%。抗疫病、炭疽病等。适宜河南全省各地（含烟区）早春保护地种植。     

苹果花脸病田间病情发展及ASSVd在组培条件下的传播

为了明确苹果锈果类病毒（apple scar skin viroid，ASSVd）引起的苹果花脸病在田间的病情发展情况以及ASSVd在组培条件下的传播方式，2012—2015年对河北省顺平南神南村3个果园进行持续调查和检测。结果显示，果园A、B、C的显症率分别从3.00%、19.35%和10.00%上升至10.00%、34.41%和22.00%，带毒率分别从11.00%、20.43%和14.00%上升至23.00%、37.63%和30.00%，带毒率和显症率都逐年增加，而且带毒率大于显症率，即有些带毒果树不显症。发病果树田间分布有明显的发病中心。通过高通量测序发现显症果树ASSVd vsiRNA reads数是带毒未显症reads数的4.08倍，同时实时荧光定量PCR检测发现显症树ASSVd病毒积累量显著高于带毒未显症树。以携带ASSVd的组培苗和无毒组培苗为试材，利用RT-PCR检测明确了ASSVd可通过伤口沾染带毒汁液、组培剪污染、含毒培养基、根系接触进行传播，其中根系接触传染率较高。     

抗根肿病秋大白菜新品种‘CR京秋新3号’

大白菜‘CR京秋新3号’是由分子标记辅助饱和回交转育获得的抗根肿病的细胞质雄性不育系CMS84427CR和自交系832172CR配制而成的中晚熟一代杂种。生育期80 ~ 85 d，植株半直立，株高44 cm左右，开展度75 cm左右。外叶绿色，叶球直筒、叠抱，球高约34 cm，宽约18 cm，净菜质量约4 kg，净菜产量约90 t • hm-2。抗根肿病2号生理小种，抗病毒病、霜霉病。适合北方地区秋季种植。     

不同种衣剂处理对青瓜生长及产量影响的研究

为探讨几种新型种衣剂在青瓜种子上的应用效果,研究了先正达迈舒平、氟虫腈、路明卫、高巧4种种衣剂对青瓜生长势、产量及抗病性的影响。结果表明:4种供试种衣剂均能不同程度地影响青瓜生长发育、产量及病害抗性。综合考虑生长势、产量等因素,表现为高巧悬浮种衣剂>先正达迈舒平悬浮种衣剂>氟虫腈悬浮种衣剂>路明卫悬浮种衣剂;在霜霉病、疫病的综合抗性上,表现为路明卫悬浮种衣剂>氟虫腈悬浮种衣剂>先正达迈舒平悬浮种衣剂>高巧悬浮种衣剂,4种供试种衣剂处理均能在一定程度上抑制霜霉病、疫病的发生。